技術文章
PCR實驗室平面布局
PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域:試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配置和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū),為了避免交叉污染,進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū),各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)設計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,適合用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證實驗區(qū)的壓力要求。
實際貯存和準備區(qū)
PCR實驗室主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝盒主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送到這個區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并再本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。該區(qū)對與氣流壓力的控制沒有嚴格的要求。
標本制備區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入值擴增反應管和測定DNA的合成。壓力梯度要求為:相對領巾區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,另外由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。
擴增反應混合物配制和擴增區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增,此外,已制備的DNA模板(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可以在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的布必要走動,個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行。
擴增產(chǎn)物分析區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定,本區(qū)是zui主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因此對本區(qū)的壓力梯度要求為相對鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其他區(qū)域。